1. Usa filtros en línea
El filtro en línea se coloca entre el muestreador automático y la columna cromatográfica (o precolumna). Los filtros en línea comunes se dividen en filtros en línea de acero inoxidable con frita reemplazable (0,5 μm o 0,2 μm) y PEEK desechable. Para filtros en línea hechos de diferentes materiales, generalmente se debe seleccionar una placa de tamiz con una apertura más pequeña que la placa de frita de la columna, para interceptar efectivamente las partículas que pueden bloquear la placa de frita de la columna cromatográfica. Una vez que se comprueba que la presión del instrumento comienza a aumentar, es posible que la frita del filtro en línea esté comenzando a obstruirse y debemos actualizarlo antes de que se obstruya por completo.
Los filtros en línea funcionan como membranas, pero no requieren ningún trabajo adicional. Después de centrifugar la muestra, todavía es posible que entre una pequeña cantidad de partículas en el instrumento, y las partículas residuales pueden ser interceptadas por el filtro en línea ubicado frente a la columna cromatográfica. Además, la ventaja del filtro en línea es que es simple y fácil de reemplazar. Por lo general, solo se necesitan 5 minutos para reemplazarlo, y se puede reiniciar para su uso, y no es necesario dedicar tiempo a reajustarlo o calibrarlo. Otra ventaja es que el filtro en línea también puede filtrar las partículas generadas por el desgaste por envejecimiento de algunas partes del instrumento. Recomiendo firmemente que cada instrumento de fase líquida esté equipado con un filtro en línea. Incluso si se utiliza una precolumna, también recomiendo instalar un filtro en línea antes de la precolumna.
2. Utilice la columna de guardia
Una precolumna es una columna cromatográfica corta instalada delante de la columna cromatográfica. Por lo general, tiene una longitud de 1-2 cm y el relleno coincide con el relleno de la columna utilizada, y el tamaño de poro de la frita utilizada no es mayor que el de la frita utilizada en la columna. La precolumna tiene dos funciones: (1) puede bloquear las partículas que pueden bloquear la columna; (2) debido a que la precolumna y el relleno de la columna coinciden, cualquier impureza química que pueda interactuar irreversiblemente con el relleno de la columna sin alcanzar un pico será capturada primero por la precolumna.
El uso de una precolumna definitivamente puede extender la vida útil de la columna. Sin embargo, antes de considerar el uso de una precolumna, se recomienda evaluar los siguientes puntos:
(1) La precolumna no es barata, así que considere si el costo de comprar la precolumna puede compensarse con el aumento de la vida útil de la columna;
(2) ¿Cuál es la vida útil de la columna de guardia? Es necesario prestar atención a cuándo se debe reemplazar el cartucho de protección, para no contaminar la columna cromatográfica porque el reemplazo es demasiado tarde;
(3) ¿Cómo lavar la columna de protección? Al enjuagar, la precolumna y la columna cromatográfica deben lavarse por separado para evitar que las impurezas acumuladas en la precolumna pasen a la columna cromatográfica;
(4) No espere aumentar la eficiencia de la columna debido a la adición de una precolumna de 1-2 cm. Aunque instalar una precolumna es similar a aumentar la longitud de la columna, el uso de una precolumna también agrega dos conectores y tubos de conexión, lo que reducirá la eficiencia de la columna del sistema del instrumento, por lo que sería bueno si la eficiencia de la columna sin un resguardo la columna podría ser mantenida.
No hace falta decir que el uso de precolumnas ciertamente puede prolongar la vida útil de la columna, pero se recomienda que cada laboratorio evalúe la necesidad de precolumnas en términos de economía y esfuerzo. Incluso con una precolumna, recomendaría colocar un filtro en línea entre la precolumna y el muestreador automático, después de todo, reemplazar el filtro en línea es más económico que reemplazar la precolumna y aumenta la vida útil tanto de la precolumna como de la columna. .
3. No ingrese muestras no tratadas
Con o sin tratamiento previo, se recomienda filtrar o centrifugar todas las muestras antes de la inyección. Por ejemplo, cuando la muestra se filtra a través de una membrana de filtro para eliminar partículas y reducir así la obstrucción de la frita de la columna cromatográfica, el tamaño de poro de la membrana de filtro debe ser menor que el tamaño de poro de la frita de la columna cromatográfica. Por lo general, las columnas cromatográficas con partículas mayores de 3 μm usan frita de 2 μm, las columnas cromatográficas con partículas de 3 μm usan frita de 0,5 μm y las columnas con partículas menores de 3 μm generalmente usan 0,2 μm frita, por lo que los filtros generales 0.45 μm se pueden usar básicamente en todas las columnas cromatográficas excepto para partículas sub-2 μm; para columnas con partículas sub-2 μm, generalmente se utilizan filtros con poros de 0.2 μm. La mayoría de las membranas de filtración están empaquetadas y se pueden conectar directamente a una jeringa para la filtración o usarse como placa de filtración en una 96-placa de pocillos.